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產(chǎn)品中心
產(chǎn)品名稱:

雞CD8分子(CD8)ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品型號: 96T/48T
更新時間: 2016-07-12
描述:CD8試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知CD8濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將CD8和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CD8的濃度呈比例關(guān)系。

產(chǎn)品介紹

 

chickenCD8分子CD8ELISA檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 

 
試驗原理
        CD8試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA.已知CD8濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將CD8和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物AB,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CD8的濃度呈比例關(guān)系。
 
試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份
96孔配置
48孔配置
96/48人份酶標板
1塊板(96T
半塊板(48T
塑料膜板蓋
1
半塊
標準品:240pg/ml  
1瓶(1.0ml
1瓶(0.5ml
空白對照
1瓶(1.0ml
1瓶(0.5ml
標準品稀釋緩沖液
1瓶(8.0ml
1瓶(4.0ml
生物素標記的抗CD8抗體
1瓶(8.0ml
1瓶(4.0ml
親和鏈酶素-HRP
1瓶(12ml
1瓶(5ml
洗滌緩沖液
1瓶(20ml
1瓶(10ml
底物A
1瓶(6.0ml
1瓶(3.0ml
底物B
1瓶(6.0ml
1瓶(3.0ml
終止液
1瓶(6.0ml
1瓶(3.0ml

 
自備材料
1. 蒸餾水。
2.  加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul200ul、500ul1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
 
樣品收集、處理及保存方法
 
1、血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原
和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
 5 保存……如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
操作注意事項
 
●   試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
●   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
●   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
●  使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物AB液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
●   使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
●   底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
●   加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
●   按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
 
 
 
安全性
 
1.   避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2.   實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3.   不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
試劑的準備
 
1.   標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:

240
pg/ml
(6號標準品)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
120
pg/ml
(5號標準品)
100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
60
pg/ml
(4號標準品)
100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
30
pg/ml
(3號標準品)
100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15
pg/ml
(2號標準品)
100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
7.5
pg/ml
(1號標準品)
100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0
pg/ml
(空白對照)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

 
 
2.   洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
 
試劑盒性能
 
1.   靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2.   特異性:不與其它細胞因子反應(yīng)。
3.   重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
操作步驟
 
1.   使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.   加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37溫育45分鐘。
4.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5.   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.   甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7.   每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.   取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.   450nm波長處測定各孔的OD值。
 
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
 
1、 儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD
2、 以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應(yīng)的CD8標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的CD8含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
3、 檢測值范圍: 0-240pg/ml
4、 敏感度:0.1pg/ml

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