睪酮(T)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

聲明：尊敬的客戶，感謝您選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品適用于體外定量檢測血清、血漿或其 它相關(guān)生物液體中天然和重組 T 濃度。使用前請仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑組分！

試劑盒組成：

特別說明：

#標(biāo)準(zhǔn)品一套的濃度分別為0 ng/mL，0.1ng/mL，0.4ng/mL，1.6ng/mL， 5ng/mL，20ng/mL。

*: [96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整） 相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請?jiān)谑褂脮r量取而非直接倒出！

檢測原理: 本試劑盒采用競爭ELISA法。首先用羊抗兔包被微孔板，制成固相二抗，然后加入待測樣本、辣 根過氧化物酶標(biāo)記的睪酮以及抗睪酮抗體，使之形成包被二抗-抗睪酮抗體-睪酮（HRP）復(fù)合物， 標(biāo)記睪酮的結(jié)合量與樣品中的睪酮量成反比。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催 化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，T濃度與OD450值之間 呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中T的濃度。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.    加樣：將預(yù)包被板從密封袋中取出，設(shè)一個空白對照孔，不加任何液體；每個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)各設(shè)兩 孔，每孔加入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；其余每個檢測孔直接加待測樣本 50μL。

2.    加完后，立即每孔加入 HRP 酶標(biāo)記的睪酮抗原 50μL（空白對照孔除外），再按同樣的順序 每孔加入檢測抗體 50μL，充分混勻，貼上覆膜，置 37℃溫育 1 小時。注意不要有氣泡，加

樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，不要觸及孔壁，輕輕晃動混勻。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次 實(shí)驗(yàn)請重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.    棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 10 秒，大約 350μL /每孔，甩干并在吸水紙上輕 拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.    每孔加底物溶液 A 液 50μL，底物溶液 B 液 50μL，振蕩混勻后，置 37℃避光顯色 15 分鐘。

（根據(jù)實(shí)際顯se情況酌情縮短或延長，但不可超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即 可終止）。

5.    每孔加反應(yīng)終止液 50μL，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物 溶液的加入順序相同。

6.    立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度（OD 值）。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀 器，設(shè)置好檢測程序。

7.    實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

結(jié)果判斷:

1.    以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，減去空白OD的OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如有設(shè)置復(fù)孔， 則應(yīng)取其平均值計(jì)算。

2.    推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，

由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將減去空白OD值的樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn) 曲線的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

3.    若樣品濃度高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計(jì)算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

靈敏度、檢測范圍、特異性和重復(fù)性:

●靈敏度：zui小可測 0.05ng/mL。

●檢測范圍：0.1–20ng/mL。

●  特異性：與孕酮，雌二醇、DHT 無交叉反應(yīng)。

●  重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<15%。